Активность АлАТ определяли с помощью тест-набора «Лахема».
Определение основано на измерении оптической плотности гидрозонов а -оксоглутаровой и пировиноградной кислоты в щелочной среде, возникающей при самопроизвольном декарбоксировании оксал-ацетата, обладает более высокой активностью.
Реактивы:
Субстрат АлАТ - DL-альфааланин 116 ммоль/л. 2 оксоглутарат 1,7 ммоль/л. фосфатный буфер рН 7,4 83 ммоль/л.
Реактив 2 - 2,4 динитрофенилгидрозин - р-р 1 ммоль/л в HCL 1 ммоль/л.
Раствор NaOH - 16 г/ 1л.
Раствор NaOH - 16 г/ 1л.
Физиологический раствор NaCl ( 900 мг/100 мл).
Проведение анализа.
Отмерить (мл).
Проба
Контрольный раствор
Субстрат АлАТ Физиологический р-р.
0,25
0,25 0,05
Инкубация точно 3 мин. при т-ре 37°С
Сыворотка крови
0,05
-
Инкубация точно 60 мин. при т-ре 37°С
Реактив 2.
0,25
0,25
Инкубация 20 мин при комнатной температуре.
Раствор NaOH
2,50
2,50
Перемешивают и спустя 10 мин. измеряют оптическую плотность пробы против контрольного раствора. Измерение проводят на СФ - 46 при длине волны 530 нм.
Калибровочный график (СФ - 46Д = 530).